T7 RNA聚合酶筛选 (高通量)
客户需求：交付一步纯化的突变体
| 客户要求 | 样品数目 | 交付周期 | 表达规模 | 质控检测 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 交付一步纯化的突变体 | 76个 | 22个事情日 | 50 mL | A280 | SDS-PAGE | 完整分子量 (随机挑选5个) |
76个RNA聚合酶表达数据统计
定制酶开发是生物手艺和生物工程领域的一项专业效劳，它专注于通过设计和改良酶，使其能够高效、有选择性地执行特定功效或催化特定反应。BET9登录网址提供卓越的综合酶开发平台，这包括了人工智能驱动的酶设计、候选酶的高通量筛选、细胞库、细胞作育工艺的优化、纯化工艺的优化、制剂开发、剖析要领开发、稳固性评估以及放大生产，从而全方位地知足客户的需求。
定制酶开发在优化酶活性、稳固性和特异性方面面临着重大挑战。在BET9登录网址，我们充分使用BET9登录网址酶开发平台，以改善酶的性能，使其能够知足种种应用和工艺的严酷要求。BET9登录网址战略涉及使用先进的机械学习工具团结重大的分子、细胞和生物剖析手艺。这一综合要领指导着我们对包括数千种酶变体的普遍文库举行精准的设计、周全的筛选和详尽的剖析，所有这些都以高通量方法举行。每个变体都经由严酷的测序，有助于识别其基因序列与功效性能之间的关联。除了酶开发，我们还使用大肠杆菌表达系统提供可放大的生产效劳。BET9登录网址在这一领域拥有富厚的履历和卓越的业绩纪录，已乐成交付了凌驾50,000批次的重组卵白，以高效和经济的方法实现了卓越产量。
包管酶活性
批次间高度一致性
人工智能赋能酶设计
先进的生产设施
1. 候选酶筛选(高通量表达)
表达体积：4-50mL
表达产能：700个样品/周
评估卵白表达水平和消融度
可以在未经纯化的样品或低纯度样品中举行酶活性测试
2. 候选酶筛选(小规模表达)
表达体积：1L (烧瓶) 或5L (发酵罐)
表达产能：200个样品/周
纯化后的产量和质量数据
检测杂质是否会影响测试
小规模表达再次确认候选物
3. 细胞库构建
载体和菌株筛选，以及密码子优化
WCB 10-50代传代稳固性测试：质粒丧失率&表达水平
使用 (DLA) 手艺对主细胞库和事情细胞库的噬菌体举行检测
周期性测试事情细胞库的活力和表达水平，以确定生涯时间
4. 上游工艺开发
表达量：20-500L（发酵罐）
发酵工艺：高密度
细胞密度 (OD 600) > 200
5. 下游工艺开发
His标签卵白或无标签卵白; 纯度 (HPLC): 高至99%
内毒素水平: <1EU /mg; 产量：高至15 g/L）
6. 剖析要领开发
7. 制剂开发
候选缓冲液的性能将在应力条件下举行测试，并在某些点检查纯度或活性
8. 稳固性评估
两种压力条件，一个月内检查纯度或活性4次
两个加速条件，6个月内检查纯度或活性3次
在贮存条件下，24个月内检查纯度或活性9次
发货状态确认
9. 放大生产
T7 RNA聚合酶筛选 (高通量)
客户需求：交付一步纯化的突变体
| 客户要求 | 样品数目 | 交付周期 | 表达规模 | 质控检测 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 交付一步纯化的突变体 | 76个 | 22个事情日 | 50 mL | A280 | SDS-PAGE | 完整分子量 (随机挑选5个) |
76个RNA聚合酶表达数据统计
T7 RNA聚合酶筛选 (1L表达规模)
客户需求：90%纯度, 交付量5mg, 去除核酸&核酸酶
用于基因编辑的X酶
项目目的：交付该基因编辑X酶的事情细胞库
备注：选择表达量突出的克隆构建MCB和WCB
1. 表达量评估 & 限制性酶切图谱
效果：通过质粒表达水平评估和限制性检查确认MCB和WCB
2. 噬菌体检测
使用 (DLA) 手艺对主细胞库和事情细胞库的噬菌体举行检测
效果：主细胞库和事情细胞库中没有噬菌体污染。
3. 质粒稳固性测试
抗生素加压WCB细胞传代作育 (P20)
效果：事情细胞库的表达水平坚持稳固，P1、P5、P10、P15 和 P20 代的SDS-PAGE效果没有显著降低。
无抗生素加压WCB细胞传代作育 (P20)
效果：事情细胞库（P1、P5和P10）传代中无显着质粒丧失。
4. 恒久细胞库活力测试
测试事情细胞库的活力和表达水平以确定细胞库贮存时间。
| 检测项 | 存储时间检查点 (月) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 3 | 6 | 12 | 18 | 24 | |
| 细胞活力 | 通过 | 通过 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 |
| 表达水平 | 通过 | 通过 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 |
用于基因编辑的X酶
项目目的：对该基因编辑酶的细胞作育和纯化工艺举行优化
| 阶段 | 项目 | 批次 1 |
|---|---|---|
| 上游工艺开发 (细胞作育) | 细胞密度 (OD 600) | 102 |
| 湿菌重量 | 234 g/L | |
| 作育时间 | 22 h | |
| 下游工艺开发 (纯化) | 外观 | 澄清, 无色, 液体 |
| 浓度 | 12.45 mg/ml | |
| 纯度 (SDS-PAGE) | >90% | |
| 纯度 (RP-HPLC) | >95% | |
| 纯度 (SEC-HPLC) | >95% | |
| 内毒素 | 1.7 EU/mg | |
| 宿主细胞残留 (HCP) | 35.49 ng/mL | |
| 宿主DNA残留 (HCD) | 0.06 ng/mL | |
| Residual DNAse |
| |
| 支原体检测 | 阴性 | |
| 产量 | 29.2 mg/L |
用于体外诊断的X酶
项目目的：对该体外诊断酶的细胞作育和纯化工艺举行优化
| 阶段 | 项目 | 批次 1 |
|---|---|---|
| 上游工艺开发 (细胞作育) | 细胞密度 (OD 600) | 162 |
| 湿菌重量 | 250 g/L | |
| 作育时间 | 22 h | |
| 下游工艺开发 (纯化) | 外观 | 黄色粉末 |
| 浓度 | 50 mg/ml | |
| 纯度 (SDS-PAGE) | >95% | |
| 纯度 (SEC-HPLC) | >99% | |
| 水分 | 4.0 % | |
| 活性 | > 40 KU/g | |
| 产量 | > 4.5 g/L |
SDS-PAGE
SEC/RP-HPLC
E.coli 宿主DNA残留检测
qPCR assay kit
支原体DNA检测
qPCR assay kit
内毒素检测
Endotoxin LAL test
E.coli 宿主细胞残留检测
ELISA assay kit
脱氧核糖核酸酶残留检测
DNaseAlert? QC System
核糖核酸酶残留检测
RNaseAlert? QC System
MAD7酶活性要领
| 缓冲液1 | 缓冲液2 | |
|---|---|---|
| sgRNA1 | 82.3% | 91.3% |
| sgRNA2 | 62.6% | 87.9% |
| sgRNA3 | 84.3% | 93.3% |
| sgRNA4 | 42.7% | 66.8% |
| sgRNA5 | 68.8% | 93.0% |
| sgRNA | 酶 | 10分钟 | 60分钟 |
|---|---|---|---|
| sgRNA3(30nM) | MAD7(5 nM) | 84.3% | 90.1% |
| sgRNA3(30nM) | MAD7(15 nM) | 93.1% | 98.2% |
| sgRNA3(30nM) | MAD7(30 nM) | 97.9% | 98.4% |
MAD7存储缓冲液筛选
| 简称 | 编号 | 缓冲液组成 | 泉源 |
|---|---|---|---|
| P | Buffer 1 | 50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, pH 7.5, 50 % (v/v)? glycerol and 1 mM TCEP | Rojek et al., 2021 |
| TA | Buffer 2 | 10 mM Tris (pH 7.4), 300 mM NaCl, 1 mM TCEP, and 50% (v/v) glycerol. | GenScript |
| TB | Buffer 3 | 10 mM Tris (pH 7.4), 300 mM NaCl, 1 mM TCEP, 0.1 mM EDTA, and 50% Glycerol | ABM |
MAD7的冻融检测
| 起始质料 | -80°C 轻度冻融 (10次) | LN2快速冻融 (10次) | |
|---|---|---|---|
| 外观 | 透明液体 | 透明液体 | 透明液体 |
| HPLC 纯度 | >99% | >99% | >99% |
| A280 浓度 (mg/ml) | 11.40 | 11.55 | 10.76 |
| SDS-PAGE 纯度 | 90% | 90% | 90% |
MAD7压力稳固性检测
| 0 天 | 5 天 | 10 天 | 30 天 | |
|---|---|---|---|---|
| 外观 (15°C) | 澄清 | 澄清 | 澄清 | 澄清 |
| 纯度 (15°C) | 99% | 99% | 99% | 99% |
| 外观 (37°C) | 澄清 | 发白 | 发白 | 发白 |
| 纯度 (37°C) | 99% | 91% | 85% | 71% |
MAD7加速稳固性检测
| 0 月 | 3 月 | 6 月 | |
|---|---|---|---|
| 外观 (5°C) | 澄清 | 举行中 | 举行中 |
| 纯度 (5°C) | 99% | 举行中 | 举行中 |
| 外观 (25°C) | 澄清 | 举行中 | 举行中 |
| 纯度 (25°C) | 99% | 举行中 | 举行中 |
MAD7恒久稳固性检测
| 0 月 | 1 月 | 2 月 | 3 月 | 6 月 | 9 月 | 12 月 | 18 月 | 24 月 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 外观 | 澄清 | 澄清 | 澄清 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 |
| A280 浓度 (mg/ml) | 11.40 | 11.36 | 11.11 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 |
| HPLC 纯度 | >99% | >99% | >99% | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 | 举行中 |
问：定制化酶的开发和交付的通例交付周期是多久 ？
答：交付周期会因项目的重大性和详细要求而有所差别，我们将由专业手艺团队举行评估以确定详细的交付时间。然而，我们一直致力于提供高效和实时的解决计划，通常情形下，我们能够在数月内完成并交付您所需的定制酶产品。
问：机械学习在酶开发历程中饰演什么角色 ？
答：BET9登录网址接纳优异的机械学习和深度学习手艺来剖析种种酶工程项目时代爆发的大宗数据荟萃，识别模子，并展望酶的行为。我们可以更高效地设计具有刷新性能的酶，更好的知足您的定制需求。
问：在举行酶开发项目的相助时，GenScript如那里置知识产权和保密问题 ？
答：我们高度重视知识产权和保密事项。BET9登录网址相助协议中包括了；つ娜ㄒ婧腿繁Ｃ舾行畔⒈Ｃ艿奶蹩。我们一直承继严酷的品德标准，致力于在相助中维护优异的伦理行为。
问：定制酶的生产规模是几多，怎样确保差别生产规模的一致性 ？
答：我们可以凭证您的详细需求扩大生产规模，无论是研究级别照旧大型工业级别。我们拥有严酷的质量控制流程，以确保在差别规模下的酶生产一致性。
问：GenScript怎样实时相识酶开发和生物手艺的最新希望 ？
答：我们拥有专门的研发团队，一直跟踪该领域的最新动态。别的，我们与领先的专家和学术机构相助，以确保我们始终站在酶开发和生物手艺立异的前沿。
