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基于CRISPR手艺的非病毒模式的细胞治疗开发依附其本钱低 ，通量高和更清静的特点 ，逐渐受到更多关注 ，也为细胞治疗商业化历程中 ，袒露出来的慢病毒载体欠缺导致产能和推广受限问题 ，提供相识决计划。

BET9登录网址推出“非病毒细胞疗法-CRISPR基因敲入优化试剂盒” ，试剂盒包括sgRNA ，Cas卵白 ，单链/双链敲入模板 ，用于验证和优化T细胞 ，NK细胞 ，iPSC等细胞基因敲入效率 ，推进支持基于CRISPR手艺敲入CAR ，TCR等序列非病毒细胞治疗开发 ，具有以下优势：

高效的验证优化

含EGFP或GFP报告基团 ，快速优化实验系统、提升敲入效率

经济快速的测试

现货快至3个事情日 ，较之定制试剂节约75%经费

无邪的试剂组合

可选恣意一个或多个组分

序列经优化与验证

每个批次产品均经由验证 ，敲入效率高达57%

试剂盒组分

化学合成sgRNA

  • HPLC纯化的SafeEdit sgRNA
  • TRAC、RAB11A敲入位点可选

高纯度Cas9卵白

  • 野生型（WTSpCas9）和增强型（eSpCas9）均可选择

基因敲入(HDR)模板

  • 单链ssDNA/共价闭合双链dsDNA敲入模板可选
  • 可添加CTS设计提升敲入效率

基因敲入增强剂（Enhancer）*

  • iPSC/T细胞等多种细胞 ，多个位点验证
  • 显著提升敲入效率高达2.4倍

* 接待咨询基因敲入增强剂（Enhancer） ，您可以联系手艺支持相识详情或订购 ，邮箱： oligo@genscript.com.cn ，电话：400-025-8686转5812或5815。

试剂盒定制

1. 请选择您需要的目的基因敲入位点:

  • TRAC : 适用于T细胞 ，常用的CAR序列敲入位点 ，sgRNA针对TRAC位点的第一个外显子区域设计
  • RAB11A : 通用的管家基因 ，适用于T细胞、NK细胞、巨噬细胞、iPSC细胞等具有RAB11A 位点的更普遍的细胞
  • 备注 :其他位点请选择 定制化sgRNA 、 基因敲入（HDR）模板合成效劳

2. 请选择您需要的基因敲入模板：

  • 野生型Cas9卵白 : 科研级 ，包括一个审定位信号（NLS）
  • 特异性增添型eSpCas9-2NLS卵白 : 通过在SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A) 两头增添审定位信号（NLS）去提升基因编辑的靶向特异性 ，更稳固 ，在提升编辑效率的同时可以降低10倍以上的脱靶效率1

3. 请选择您需要的基因敲入模板：

  • GenExact? ssDNA: 单链模板
  • GenWand? dsDNA: 双端共价关闭双链模板
  • GenEaxct? ssDNA和GenWand? dsDNA： 推荐同时选择两者 ，较量选择合适您实验系统的敲入模板类型

4. 您是否需要在您的基因敲入模板上增添CTS序列去提升敲入效率？
    (CTS设计提升编辑效率的计划详见文献报告和案例分享 ，实验操作详见操作指南)

  • 需要 ：CTS序列让 RNP（Cas9+sgRNA）团结至敲入模板两头 ，增进模板进入细胞核 ，提升敲入效率 ，单链模板需要配合退火引物使用
  • 不需要
确认提交

试剂盒产品详情

请查收您的定制化试剂盒 ，凭证《BET9登录网址的实验操作指南》的推荐试剂剂量 ，可以用于约12个反应的实验（Lonza 4D电转平台） ，或用于25个反应的实验（Neon电转平台） ，您可以凭证您的实验系统和试剂用量增减产品数目 ，确保每个组分的交付量足够支持您开展实验。

货号 产品名称 数目
KIOK1-1.5
 SafeEdit TRAC sgRNA - 1.5 nmol
KIOK1-3
 SafeEdit TRAC sgRNA - 3 nmol
KIOK1-6
 SafeEdit TRAC sgRNA - 6 nmol
KIOK2-1.5
 SafeEdit RAB11A sgRNA - 1.5 nmol
KIOK2-3
 SafeEdit RAB11A sgRNA - 3 nmol
KIOK2-6
 SafeEdit RAB11A sgRNA - 6 nmol
KIOK3-100
 Ultra eSpCas9 - 100 μg
KIOK3-200
 Ultra eSpCas9 - 200 μg
KIOK3-400
 Ultra eSpCas9 - 400 μg
KIOK4-100
 Ultra WTSpCas9 - 100 μg
KIOK4-200
 Ultra WTSpCas9 - 200 μg
KIOK4-400
 Ultra WTSpCas9 - 400 μg
KIOK5
 ssDNA_TRAC_EGFP - 50 μg
KIOK6
 ssDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg
KIOK7
 dsDNA_TRAC_EGFP - 50 μg
KIOK8
 dsDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg
KIOK9
 ssDNA_RAB11A_GFP - 50 μg
KIOK10
 ssDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg
KIOK11
 dsDNA_RAB11A_GFP - 50 μg
KIOK12
 dsDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg
KIOK13
 TRAC CTS Annealing Oligo - 2 nmol
KIOK14
 RAB11A CTS Annealing Oligo - 2 nmol

备注：ssDNA选择含CTS模板必需配套使用对应位点的退火引物 ，dsDNA自己即为双链无需退火

 

您可以凭证现实需求选择加购以下产品：

货号 产品名称 数目
KIOK3-100
 Ultra eSpCas9 - 100 μg
KIOK3-200
 Ultra eSpCas9 - 200 μg
KIOK3-400
 Ultra eSpCas9 - 400 μg
KIOK4-100
 Ultra WTSpCas9 - 100 μg
KIOK4-200
 Ultra WTSpCas9 - 200 μg
KIOK4-400
 Ultra WTSpCas9 - 400 μg
 

参考文献

1. Slaymaker, et al. Rationally engineered Cas9 nucleases with improved specificity. Science 351, 84–88 (2016).

2. Shy, et al. Hybrid ssDNA repair templates enable high yield genome engineering in primary cells for disease modeling and cell therapy manufacturing. bioRxiv 2021.09.02.458799.

手艺资源

问题
基因敲入优化试剂盒实验操作指南
  • 基因敲入实验办法与试剂比例
  • CTS序列实验操作办法
  • Enhancer使用办法
免费下载 免费下载
问题
《UCSF基因编辑应用于细胞治疗实例质料》
  • 含CTS序列敲入模板怎样提升基因编辑效率？
免费下载 免费下载

常见问题

相关效劳

如您有任何问题请联系BET9登录网址
CRISPR基因敲入优化试剂盒

CRISPR基因敲入优化试剂盒

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