产品特点

超宽线性规模

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产品检测线性规模为4.8×10⁷ to 2.5×10⁹ Capsids/mL
。

自带AAV2质控品

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ELISA试剂盒产品自带AAV2质控品，无需单独购置
。

高检测细密度

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产品批内差≤10%，批间差≤15%，包管滴度测定细密度
。

无邪设置

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8孔x12条，提供96次检测，可拆卸板条，无邪取用，随取随用
。

产品列表

检测原理

• AAV2滴度衣壳卵白ELISA试剂盒

  BET9登录网址AAV2滴度衣壳卵白ELISA试剂盒使用了两种抗AAV2衣壳卵白的单克隆抗体，它们可与衣壳卵白的差别表位团结
  。当标准品或样品加入捕获板时，AAV2衣壳卵白可以被包被在捕获板上的抗衣壳卵白捕获抗体捕获
  。然后在系统中加入与生物素团结的抗衣壳卵白检测抗体，该检测抗体可以与捕获板上团结的衣壳卵白相互作用
  。随后添加的链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物 （Streptavidin-HRP）可与生物素偶联的抗衣壳卵白抗体（Biotin Anti-AAV2 Antibody）相互作用
  。在洗涤办法后，加入3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺溶液（TMB溶液），可在系统中形成蓝色复合物
  。通过添加终止溶液终止反应
  。终止溶液可使的系统颜色从蓝色变为黄色
  。颜色强度可以通过酶标仪在450nm和650nm处读取
  。测试样品中衣壳卵白的浓度可凭证衣壳卵白标准曲线实现准确定量
  。

  

  Figure 1：AAV2滴度衣壳卵白ELISA试剂盒检测原理

验证数据

• 高准确度和接纳率

  接纳率用于确定剖析物检测是否受样品基质差别的影响，通过将已知量的剖析物加标到差别的样品基质中来验证接纳率
  。以下是凭证具有代表性的准确度验证天生的报告和数据示例，在这项验证中，使用3批次试剂盒（Cat. No. L00942, GenScript），将已知量的剖析物加标到基质中混淆验证接纳率，样本重复丈量3次
  。凭证性能评估效果，接纳率应在80%-120%，则以为样品基质瞄准确定量剖析物的能力影响最小
  。

  Table 1：三批次试剂盒接纳率测试效果

  批次	重复次数	平均测值 Capsids/mL	接纳率
  			实测	标准：80%-120%
  #1	3	1.99E+09	93%	切合
  #2	3	2.05E+09	117%	切合
  #3	3	1.86E+09	95%	切合

• 高检测细密度

  A. 批内细密度/重复性

  批内细密度验证体现测定板内每孔之间的重复性，有助于确保在测定板的差别孔中运行样本检测可以给出可靠的效果
  。

  以下是凭证具有代表性的批内细密度验证天生的报告和数据示例，在这项验证中，使用试剂盒（Cat. No. L00942, GenScript）划分对低、中、高3个浓度水平的样本举行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本盘算10次丈量浓度效果的平均值（M）和标准差（SD），盘算变异系数（CV）
  。凭证性能评估效果，所测效果%CV应低于10%，批注该测定具有优异的重复性
  。

  Table 2：三批次试剂盒批内细密度验证效果

  批次编号	重复次数	平均测值 Capsids/mL	%CV
  			实测	标准：≤10%
  #1	10	1.37E+08	5%	切合
  #1	10	4.71E+08	3%	切合
  #1	10	1.87E+09	4%	切合
  #2	10	1.65E+08	3%	切合
  #2	10	5.15E+08	2%	切合
  #2	10	1.99E+09	3%	切合
  #3	10	1.41E+08	5%	切合
  #3	10	4.64E+08	4%	切合
  #3	10	1.79E+09	5%	切合

  B. 批间细密度

  批间细密度体现统一样品在多批测定间的重现性，有助于确保在差别批次试剂盒中运行样本检测可以给出可靠的效果
  。

  以下是凭证具有代表性的批间细密度验证天生的报告和数据示例，在这项验证中，使用3个差别批次试剂盒（Cat. No. L00942, GenScript）划分对低、中、高3个浓度水平的样本举行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本盘算30次丈量浓度效果的平均值（M）和标准差（SD），盘算变异系数（CV）
  。凭证性能评估效果，所测效果%CV应低于15%，批注该测定具有优异的批间细密度
  。

  Table 3：三批次试剂盒批间差验证效果

  批次数目	重复次数	平均测值 Capsids/mL	%CV
  			实测	标准：≤15%
  3	3×10	1.47E+08	9%	切合
  3	3×10	4.83E+08	5%	切合
  3	3×10	1.88E+09	6%	切合

• 交织作用验证

  凭证AAV2滴度衣壳卵白ELISA试剂盒产品手册中的操作指南举行相关AAV滴度测定
  。将血清型1、2、5、6、8、9和DJ的AAV空载衣壳卵白作为样品，以各自差别的浓度添加到ELISA试剂盒微孔板中
  。检测获得的OD值如下
  。

  血清型	衣壳卵白浓度	吸光度（450/650nm）
  	(Capsids/mL)	重复1	重复2	平均值
  AAV 1	1.07E+10	0.0124	0.0118	0.0121
  AAV 2	1.20E+10	4.975	5.0119	4.99345
  AAV 5	4.29E+10	0.0149	0.0128	0.01385
  AAV 6	3.13E+10	0.0169	0.0153	0.0161
  AAV 8	2.31E+10	0.0162	0.013	0.0146
  AAV 9	1.22E+10	0.0138	0.014	0.0139
  AAV DJ	1.48E+10	0.0138	0.0131	0.01345
  空缺比照 （仅缓冲液）	0	0.0134	0.0114	0.0124

  AAV2衣壳卵白样本的OD值高于空缺比照的OD值，而所有其他测试血清型的AAV衣壳卵白样本的OD值都在配景规模内
  。AAV2滴定衣壳卵白ELISA试剂盒为AAV2滴定举行了特定校准，不可应用于其他血清型的AAV的滴定测定
  。

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