CRISPR gRNA数据库

BET9登录网址提供超20,000种含有gRNA序列的plentiCRISPRV2质粒
，所有sgRNA序列已经被MIT验证
。在数据库中
，您可通过搜索基因名称
，基因标记或ID来查找相关gRNA
。

为知足您多种需求
，BET9登录网址不但提供多种Cas9类型的定制质粒
，也提供经由MIT验证的空载供您选择
。

一、定制质粒类型

凭证Cas9类型
，定制质粒包括如下几种：

1. 增强CRISPR/SpCas9质粒-eSpCas9^New

特异性增强SpCas9（Enhanced specificity SpCas9
，eSpCas9）
，指的是SpCas9（K848A/K1003A/R1060A）
，是经由MIT张锋实验室特异性刷新的质粒（Slaymaker et al. 2016）.eSpCas9可以降低脱靶效率
，比自然SpCas9脱靶效率降低10倍之多
，同时可实现基因高效编辑
。

Cas9基因组编辑依赖于DNA双链的疏散
。sgRNA与非靶向DNA序列的不匹配可能导致非特异性团结和破碎
。为了提高基因组编辑的特异性
，科学家开发了突变为K848A、K1003A和R1060A的eSpCas9
。在SpCas9的非靶链沟槽内中和这些带正电荷的残基
，既可以镌汰非靶团结
，也可以刺激靶向团结
，这一操作需要更严酷的Watson-Crick碱基配对
。

2. SpCas9质粒^Hot

Cas9内切酶是基因编辑的研究标准
。当与单导RNA（single guide RNA
，sgRNA）序列结适时
，这些酶在基因组中爆发位点特异性双链断裂（double strand breaks
，DSBs）
。

• SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one载体中表达
  ，也可以在dual载体中单独表达
  。
• 优选的靶上SpCas9 PAM序列为NGG
  。
• SpCas9还包括NGA序列的目的亲和力
  。

3. SpCas9 Nickase质粒

SpCas9 nickase（Cas9n D10A）包括一个突变
，差别于SpCas9切割时形成DSB
，SpCas9 nickase在切割序列时形成单链缺口
。经由SpCas9 nickase切割后
，两个相对的gRNA序列可以有用配对
，由于这种要领可以阻止不须要的插入
。

4. SaCas9质粒

黄色葡萄球菌Cas9同源体（Staphylococcus aureus Cas9 orthologue
，SaCas9）是腺相关病毒（adeno-associated virus AAV AAV）应用的理想内切酶
。SaCas9比SpCas9约莫短1kb
，这允许了在AAV组装时越发无邪
。AAV载体较低的免疫原性
，使SaCas9很是适合于体内编辑的
。

• 优选的靶SaCas9 PAM序列为NNGRRT
  。
• SaCas9对NNGRRN也有很高的亲和性
  。

5. 转录激活（Transcription Activation
，SAM）质粒

CRISPR/Cas9协同激活介质（SAM）系统已被设计用于激活下游目的的转录
。SAM系统使用三种差别的激活因子
，VP64、P65和HSF1
，它们被组装到催化失活的Cas9（dead Cas9
，dCas9）复合物上驱动转录
。

• SAM复合物由三个组分组成：一个由两个MS2 RNA适配体组成的gRNA、一个催化失活的dCas9-VP64融合卵白
  ，和一个MS2-p65-hsf1激活因子融合卵白
  。
• SAM系统能够激活编码和非编码的元素
  。
• 查找经由MIT验证的SAM gRNA序列
  ，请前往gRNA数据库
  。

二、空载效劳

为知足您的科研需要
，BET9登录网址提供空载效劳
，载体序列已经由MIT验证
。这些载体包括一个17bp-1.8kb的可表达毗连体
，以取代定制的sgRNA序列
，您可凭证需要对其举行修改
。